生物實驗心得體會(精選多篇)

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第一篇:生物實驗心得體會

生物實驗心得體會(精選多篇)

生物學是一門以實驗為基礎的自然科學,現代生物科學的發展尤其依賴科學實驗。在生物教學中,實驗、學習和觀察等實踐環節對我們掌握生物學知識、科學方法、培養我們的動手能力和形成科學素質都起到了至關重要的作用。正是因此,從我們開始接觸生物這門學科開始,就不斷有生物實驗課程,鍛鍊我們各式各樣的能力。

但是,也的確是上過各式各樣的生物實驗課,我才更加深刻的感受到這次做的現代生物技術綜合實驗對我的影響有多大。

首先,我一定得提的,便是金衛華老師,還有金老師給我們提出的實驗要求。

獨到的實驗安排,讓我聽後為之一震,因為從國中開始,甚至是大學的前兩年間,沒有一位老師有提過,要求我們在學校安排好的實驗課時間以外也能來實驗室做實驗,當然這大概也與我們的生物技術試驗的內容安排有密不可分的關係。一直以來,我們都循規蹈矩的準確服從著課程表給我們定下的規則,而金老師卻輕描淡寫,揚手舞舞便打破了籠罩著我們多年的“囚籠”。有時,我甚至會暗想,伴隨著這種思維限制的打破,是否也會激發出我們名為想象力的翅膀,讓我們能夠在知識的世界中翱翔呢?

好好,不能扯太遠,還需要拉回我心得的主題——實驗!老師在第一次課上,對我們詳盡的講解了我們此學期需要完成的一系列實驗。其中全是環環相扣,嵌合緊密,有點一招即失,滿盤皆輸的壓力,不過我們更多的是懷著一種躍躍欲試的激動,恨不得立馬動手,靠著自己學來的知識,認真的完成這套實驗,並且還能看到最終那令人欣喜的結果。就這麼妄想著妄想著,我們從第二週開始的現代生物技術綜合實驗的漫長旅程。

由於,老師沒有硬性的要求實驗時間,我們便是一有空閒就往實驗室裡鑽,也就少了以前實驗課上出現的,因為部分實驗儀器的數量缺少,同學們每次做實驗都是你推我嚷的,造成了實驗興趣的流失。以至於做實驗的態度越來越渙散,甚至只是簡單的走下過場而已,幾次實驗課下來,熱情全無。但按照金老師的提議來,大家來實驗的時間不同,使得對儀器使用的時間錯開,減少了為爭搶儀器或是藥品而嘈雜不堪的場面,實驗也變得順利了許多。

金老師會很體諒一些先開始忙活的同學,在黑板上寫清他們實驗大概會做到的步驟和注意事項,後面實驗的準備物品和要求,然後開始在忙於實驗而奔走中的同學之間晃悠。觀察我們的實驗操作,或是時不時提點解釋一下我們實驗步驟的緣由;實驗藥品的作用;如何做會得到更好的結果;實驗沒有得到好的結果或是做的失敗了的原因。可是,隨著實驗的發展,後來更多的時候,是我們在看過書本上要求的實驗步驟後,去纏著金老師,圍在他周圍,問他關於實驗的各種問題,就算同樣的問題被問過許多次,金老師依然是和藹的笑著一一解答我們的疑問,他的平易近人,他的悉心教導,他的不驕不躁,他的耐性與笑容都深深的打動了實驗中的每位同學。

其實,他的這種教學方式,亮點就在於此,自主實驗迫使我們會仔細品味步驟中的點滴;實驗過程中的出現的各種問題,就要求我們會去思考如何排除,繼續實驗;實驗結果的不理想,更是強迫我們能認真回顧實驗中的任何細節,找出問題所在,也會需要我們去深入瞭解這步實驗的機理,用藥品的理由,實驗操作要求等。這些自己通過自己動手動腦而逐步累積起來的經驗,是在以往任何時候都沒有獲得過的,那時,只知道按照老師和書本上寫的步驟來,根本不在意為什麼要這麼做,於是少了對實驗的探究,能學到的東西自然也減少。

說完對金老師和老師教育方式的看法,其次我想談談,我在這樣的教學指導下獲得的收穫。

我是一個很懶散的人,以前做實驗,大部分都是照本宣科,很少動腦筋去思考實驗的前因後果,對臺上老師的講解也都是一知半解的混著。但是,這次實驗著實讓我很費了一番腦子,有深入的去了解箇中原理,實驗操作的機理,儀器的使用方法,幫助我糾正和熟練許多操作,同時讓我認識到自己以前的迷糊與不負責任,也讓我體會到全身心的投入到一件事中,是如此快樂和滿足,還得到了好多在課堂上永遠無法獲得的知識。下面,具體說說看我的幾件不小的收穫。

有小到大來敘述,分有這樣一些。第一件,混實驗室久了,我有了可以“變出”任何大家想要的器皿的“功能”,只要是實驗室裡有的且我們熟知的物品(老師打包裝起來的不算),無論是藥品試劑,還是不同規格的量筒試管,我都可以摸出來,省去了四處找老師尋求幫助的時間和氣力。第二件,學會了配置許多的試劑,於是知道了不同的試劑配置需要注意的問題,鞏固了某些藥品相關的知識,並且在多次配置時,得出了一個結論:如果不是很熟悉的試劑配方,最好是拿一個專門的本子記錄下來,以備不時之需,這樣一來,以後實驗也不會因為試劑的問題而手忙腳亂。第三件,實驗步驟需要仔細的斟酌其中的奧祕,每一步如此走,自然有前人的用意,畢竟這些實驗都是過去的科學家研究出來的精華繼承,理解了他們的意圖和原由,做起實驗來會更加的得心應手也不易遺忘或出錯。第四件,這件是我最大的心得,也不全是從此次實驗中得來,且也不是隻能運用於做實驗中,這份心得是:在決定要做的事情後,最好考慮清楚行動時會需要用些什麼,做些什麼,將準備工作做好,為後續行動鋪墊,按其規律列好清單,會使得實驗或者任何別的事情做得更加順利,有條理,排除做過多無用功的可能性,提高了效率的同時還降低錯誤失誤的出現概率,成功率也會增高。

以上是我這個學期裡,從現代生物技術綜合實驗裡得到的一些心得。我希望在下個學期裡,我能將自己從這裡得到的心得,學習應用到其他的實驗甚至是學習生活中去,擴充自己的知識,拓寬自己的視野,增厚自己的底蘊,加強自己的能力,不敢放言稱自己要成為未來生物界中的一流人才,只能勉勵自己成為一個不負眾望的有用的人。

第二篇:生物實驗心得體會

實驗心得體會

在真正投入到創新實驗計劃當中之前,我以為不會很難。因為課內實驗我們也做了很多,只要做好預習工作,好好聽老師的講解,再加上自己多動腦筋,幾乎沒遇上什麼比較大的困難,實驗完成起來也比較快。各種各樣的實驗加起來,涉及的知識面很廣,學到了很多,讓自己對於這樣的研究與實驗工作也更加感興趣。

但是真正開始創新實驗計劃時,發現我彷彿進入了一個新的空間。一切要從頭學起,從最簡單的做起。與高年級的學長比起來,自己的基本實驗技能與專業知識少的可憐,面對那些精密的儀器與無數的文獻資料,信心一下子被澆熄了大半。每天跟在學長後面做著清洗瓶子,到掃衛生,摘桑葉,諸如此類的體力活。貌似什麼也學不到,看著學長學姐一言不發的熟練操作,卻一點也摸不到頭腦。 有時真的懊惱的有些想洩氣,但幸虧老師常常與我們開會討論,開導鼓勵我們,他還時常有意無意地啟發我們的安全防範意識。古語說的沒錯:耳濡目染。一天天下來,不知不覺當中,我們的實驗技巧越來越熟練,對於一些儀器的基本操作也能單獨上手,學長學姐很有耐心地一次次糾正我們犯下的或大或小的錯誤,並不厭其煩的叮囑我們注意安全。

漸漸地我們可以單獨完成一些比較系統全面的實驗工作。但錯誤當然也是不可避免的,而且人往往要犯錯之後才能明白如何不犯錯和為什麼不要犯下這樣的錯誤。比如因為我們某一步的實驗操作不規範,導致最後的實驗結果不盡入人意,無法納入最後的總結分析中,也就是說我們白忙活一場。其實這樣的失敗也未嘗不是一件好事,通過它我們更加清晰地認識到這個實驗步驟的原理、影響及具體細節。

重複這是整個實驗過程中常做的一件事,面對規律性不強的實驗結果,我們只有一次次反思,重新再來,如果一而再再而三的重複失敗,我們就只得求助於學長學姐和老師們了,但是這樣具體的操作細節中失誤,非當事人又是無法完全瞭解的,還是需要我們自己一點一點的去摸索。

當然整個實驗過程中最困難的還要數自行設計實驗的具體步驟了,老師所能給的知識一個全面概括的指導意見,讓我們不致發生方向性的失誤。老師也給了我們一些相關的文獻資料,但同樣的道理,具體到某一方面我們還是要自己去搜索,篩選,概括。有時甚至要面對一些英文文獻,僅憑我們已有的英文水平還過於單薄。困難就是讓人來解決的。我們摸索前進,自己跑到機房查資料,下載翻譯軟體,制定實驗方案,閱讀大量晦澀難懂的文獻,失敗了就再來一次,總結後再勇往直前。困難一個接著一個,但既然選擇了這條路,我們就要毅然決然的走下去,不管後面的路是沼澤泥濘還是荊棘叢生。

終於我們的實驗資料慢慢變得有規律起來,面對棘手的麻煩我們也能鎮定自若,實驗的因素探索一個個完成,一點點接近於目標。回望之前,發現與取得的成績,獲得的知識相比,以前都算不了什麼。

不得不承認,通過這項本科實踐創新訓練專案,我們學到了很多,得到了很多,有些是書本上永遠也學不來的,有些僅靠我們自己摸索幾乎為不可能的,有些僅憑我們自行監督是無法堅持下來的。

在這裡要感謝關心愛護我們的老師,學長學姐還有同屆同學以及學弟學妹,沒有你們我們無法完成這項艱鉅的工作。

實驗一 :本次試驗中對交換機的基本配置的學習研究有了新的體會,在計算機上配置交換機的基本配置,掌握交換機命令列各種操作模式的區別,以及模式之間的切換。實現上有了一定的突破,在配置過程中用到的命令,讓我感覺到英語也要多學習,尤其是專業英語,對配交換機有很大方便!

實驗二:這次實驗關於交換機的全域性配置,通過交換機的全域性的基本配置,讓我充分明白配置交換機的裝置名稱和配置交換機的描述資訊必須在全域性配置模式下執行。hostname配置交換機的裝置名稱。當用戶登入交換機時,你可能需要告訴使用者一些必要的資訊。你可以通過設定標題來達到這個目的。你可以建立兩種型別的標題:每日通知和登入標題。banner motd配置交換機每日提示資訊motdmessage of the day。banner login配置交換機登入提示資訊,位於每日提示資訊之後。

實驗三:做實驗既能加深我們對實驗原理的理解和認識,學會應用這些原理,又能煅煉我的動手能力,通過這次實驗讓我明白對於網路,我們要樹立重視實踐更甚於重視理論的觀點!業餘時間擴寬計算機網路硬體方面的視野,尤其希望可以去電信公司的機房參觀學習,提高個人修養與能力;加強本實驗小組內部各成員之間的交流,現在的團隊合作精神很重要,要及早的去培養。

實驗四:這次實驗總體來說沒什麼困難,都是一些基本的交換機配置,但是最後的思考題中提出一些問題還是很有意思的,配置起來也很有趣。主要是檢視交換機的系統和配置資訊。主要要到的技術原理是檢視交換機的系統和配置資訊命令要在特權模式下執行。showversion檢視交換機的版本資訊,可以檢視到交換機的硬體版本資訊和軟體版本資訊,用於進行交換作業系統升級時的依據。show mac-address-table檢視交換機當前的mac地址表資訊。show running-config檢視交換機當前生效的配置資訊。

實驗五:通過這次實驗,讓我明白了一個道理磨刀不誤砍柴工。前期的知識儲備、文獻儲備、材料準備、方法準備可以避免手忙腳亂,充分的預實驗使你充滿信心。一步一個腳印,就不必“從頭再來”。最不能容忍的是在開始的幾步偷懶,造成後面總有一些無法排除的障礙。這次實驗讓我學會了vlan(virtual local area network,虛擬區域網)是指在一個物理網段內,進行邏輯的劃分,劃分成若干個虛擬區域網。vlan最大的特性是不受物理位置的限制,可以進行靈活的劃分。

實驗六:這次實驗總體來說沒什麼困難,都是一些基本的交換機和vlan配置,但是最後的思考題中提出一些問題還是很有意思的,配置起來也很有趣。讓我明白了千萬不能把時間全部消耗在實驗臺上。看文獻、看書、看別人的操作、聽別人的經驗、研究別人的思路,邊做邊思考。要學會比較,不要盲從。否則,會被一些小小的問題困擾許久。要想讓自己知識更加的豐富,只有讓自己的理論與實踐相應的結合起來;才會學到更加豐厚的知識和地道的經驗!

實驗七:通過這次實驗,讓我體會到對於網路,我們要樹立重視實踐更甚於重視理論的觀點,做實驗既能加深我們對實驗原理的理解和認識,學會應用這些原理,又能煅煉我的動手能力,人總是有一點虛榮心的。只把成功的步驟或漂亮的結果記到實驗記錄裡,是很多人的做法。殊不知,許多寶貴經驗和意外發現就這樣與你擦肩而過。客觀、真實、詳盡的記錄是一筆寶貴的財富。

實驗八:計算機網路的實驗在做了幾周後終於把交換機有關的實驗的全部做好了!個人感覺通過這幾次實驗,自己在計算機網路方面有了很多的瞭解,對計算機網路也有了更多的興趣!讓我明白了英語也要多學習,尤其是專業英語,對配置路由,交換機有很大方便,根據需要加深網路程式語言的學習;多看看<網路工程師>方面的書,對了解網路有很大幫助.對於網路,我們要樹立重視實踐更甚於重視理論的觀點!

實驗九:本次試驗中對路由器命令列各種操作模式學習研究有了新的體會,在計算機上配置路由器命令列各種操作模式,掌握路由器命令列各種操作模式的區別,以及模式之間的切換。實現上有了一定的突破,在配置過程中用到的命令,讓我感覺到英語也要多學習,尤其是專業英語,對配交換機有很大方便!

實驗十:這次實驗關於路由器埠的基本配置,通過路由器埠的基本配置,讓我充分明白

銳捷路由器介面fastethernet介面預設情況下是10m/100m自適應埠,雙工模式也為自適應,並且在預設情況下路由器物理埠處於關閉狀態。路由器提供廣域網介面(serial高速同步串列埠),使用v.35線纜連線廣域網介面鏈路。在廣域網連線時一端為dce(資料通訊裝置),一端為dte(資料終端裝置)。要求必須在dce端配置時鐘頻率(clock rate)才能保證鏈路的連通。在路由器的物理埠可以靈活配置頻寬,但最大值為該埠的實際物理頻寬。

實驗十一:通過檢視路由器的系統和配置資訊實驗,加深我們對實驗原理的理解和認識,學會應用這些原理,又能煅煉我的動手能力,通過這次實驗讓我明白對於網路,我們要樹立重視實踐更甚於重視理論的觀點!業餘時間擴寬計算機網路硬體方面的視野,尤其希望可以去電信公司的機房參觀學習,提高個人修養與能力;加強本實驗小組內部各成員之間的交流,現在的團隊合作精神很重要,要及早的去培養。

實驗十二:通過這次實驗,讓我明白做過實驗的人都經歷過失敗和挫折。有些失敗應當在預實驗階段發生,你這時能坦然接受。假如不做預實驗,在正式的實驗中遇到,你的挫折感就很明顯。假如你因為趕時間而誤操作,你會沮喪。假如你能因為目前心浮氣燥而果斷地放一放,就可以避免悲劇的發生。假如你早上進入實驗室之前還不知道今天要幹什麼,你最好想好了再去。最大的錯誤是重複犯同樣的錯誤。記住,屢教不改者不適合做實驗,要想讓自己知識更加的豐富,只有讓自己的理論與實踐相應的結合起來;才會學到更加豐厚的知識和地道的經驗!

第三篇:生物實驗心得體會

實驗心得體會

在真正投入到創新實驗計劃當中之前,我以為不會很難。因為課內實驗我們也做了很多,只要做好預習工作,好好聽老師的講解,再加上自己多動腦筋,幾乎沒遇上什麼比較大的困難,實驗完成起來也比較快。各種各樣的實驗加起來,涉及的知識面很廣,學到了很多,讓自己對於這樣的研究與實驗工作也更加感興趣。

但是真正開始創新實驗計劃時,發現我彷彿進入了一個新的空間。一切要從頭學起,從最簡單的做起。與高年級的學長比起來,自己的基本實驗技能與專業知識少的可憐,面對那些精密的儀器與無數的文獻資料,信心一下子被澆熄了大半。每天跟在學長後面做著清洗瓶子,到掃衛生,摘桑葉,諸如此類的體力活。貌似什麼也學不到,看著學長學姐一言不發的熟練操作,卻一點也摸不到頭腦。 有時真的懊惱的有些想洩氣,但幸虧老師常常與我們開會討論,開導鼓勵我們,他還時常有意無意地啟發我們的安全防範意識。古語說的沒錯:耳濡目染。一天天下來,不知不覺當中,我們的實驗技巧越來越熟練,對於一些儀器的基本操作也能單獨上手,學長學姐很有耐心地一次次糾正我們犯下的或大或小的錯誤,並不厭其煩的叮囑我們注意安全。

漸漸地我們可以單獨完成一些比較系統全面的實驗工作。但錯誤當然也是不可避免的,而且人往往要犯錯之後才能明白如何不犯錯和為什麼不要犯下這樣的錯誤。比如因為我們某一步的實驗操作不規範,導致最後的實驗結果不盡入人意,無法納入最後的總結分析中,也就是說我們白忙活一場。其實這樣的失敗也未嘗不是一件好事,通過它我們更加清晰地認識到這個實驗步驟的原理、影響及具體細節。

重複這是整個實驗過程中常做的一件事,面對規律性不強的實驗結果,我們只有一次次反思,重新再來,如果一而再再而三的重複失敗,我們就只得求助於學長學姐和老師們了,但是這樣具體的操作細節中失誤,非當事人又是無法完全瞭解的,還是需要我們自己一點一點的去摸索。

當然整個實驗過程中最困難的還要數自行設計實驗的具體步驟了,老師所能給的知識一個全面概括的指導意見,讓我們不致發生方向性的失誤。老師也給了我們一些相關的文獻資料,但同樣的道理,具體到某一方面我們還是要自己去搜索,篩選,概括。有時甚至要面對一些英文文獻,僅憑我們已有的英文水平還過於單薄。困難就是讓人來解決的。我們摸索前進,自己跑到機房查資料,下載翻譯軟體,制定實驗方案,閱讀大量晦澀難懂的文獻,失敗了就再來一次,總結後再勇往直前。困難一個接著一個,但既然選擇了這條路,我們就要毅然決然的走下去,不管後面的路是沼澤泥濘還是荊棘叢生。

終於我們的實驗資料慢慢變得有規律起來,面對棘手的麻煩我們也能鎮定自若,實驗的因素探索一個個完成,一點點接近於目標。回望之前,發現與取得的成績,獲得的知識相比,以前都算不了什麼。

不得不承認,通過這項本科實踐創新訓練專案,我們學到了很多,得到了很多,有些是書本上永遠也學不來的,有些僅靠我們自己摸索幾乎為不可能的,有些僅憑我們自行監督是無法堅持下來的。

在這裡要感謝關心愛護我們的老師,學長學姐還有同屆同學以及學弟學妹,沒有你們我們無法完成這項艱鉅的工作。

第四篇:生物實驗心得體會劉煥龍

實驗心得體會

在真正投入到srp實驗——苦馬豆的黃酮提取計劃當中之前,我以為不會很難,覺得只要做好準備工作,好好聽導師的講解,再加上自己多動腦筋,實驗應該能夠順利進行。各種各樣的實驗加起來,涉及的知識面很廣,學到了很多,讓自己對於這樣的研究與實驗工作也更加感興趣。

但是真正開始創新實驗計劃時,發現我彷彿進入了一個新的空間。一切要從頭學起,從最簡單的做起。與高年級的學長比起來,自己的基本實驗技能與專業知識少的可憐,面對那些精密的儀器與無數的文獻資料,信心一下子被澆熄了大半。每天跟在組長後面做著清洗瓶子,到掃衛生諸如此類的零活。貌似什麼也學不到,看著組長一言不發的熟練操作,卻一點也摸不到頭腦。

有時真的懊惱的有些想洩氣,但幸虧老師有時會與我們討論,開導鼓勵我們,還時常有意無意地啟發我們的安全防範意識。古語說的沒錯:耳濡目染。一天天下來,不知不覺當中,我的實驗技巧越來越熟練,對於一些儀器的基本操作也能單獨上手,組長很有耐心地一次次糾正我們犯下的或大或小的錯誤,並不厭其煩的叮囑我們注意安全。

漸漸地我們可以單獨完成一些比較系統全面的實驗工作。但錯誤當然也是不可避免的,而且人往往要犯錯之後才能明白如何不犯錯和為什麼不要犯下這樣的錯誤。比如因為我們某一步的實驗操作不規範,導致最後的實驗結果不盡入人意,無法納入最後的總結分析中,也就是說我們白忙活一場。其實這樣的失敗也未嘗不是一件好事,通過它我們更加清晰地認識到這個實驗步驟的原理、影響及具體細節。

重複這是整個實驗過程中常做的一件事,面對規律性不強的實驗結果,我們只有一次次反思,重新再來,如果一而再再而三的重複失敗,我們就只得求助於學長學姐和老師們了,但是這樣具體的操作細節中失誤,非當事人又是無法完全瞭解的,還是需要我們自己一點一點的去摸索。

當然整個實驗過程中最困難的還要數自行設計實驗的具體步驟了,老師所能給的知識一個全面概括的指導意見,讓我們不致發生方向性的失誤。老師也給了我們一些相關的文獻資料,但同樣的道理,具體到某一方面我們還是要自己去搜索,篩選,概括。有時甚至要面對一些英文文獻,僅憑我們已有的英文水平還過於單薄。困難就是讓人來解決的。我們摸索前進,自己跑到機房查資料,下載翻譯軟體,制定實驗方案,閱讀大量晦澀難懂的文獻,失敗了就再來一次,總結後再勇往直前。困難一個接著一個,但既然選擇了這條路,我們就要毅然決然的走下去,不管後面的路是沼澤泥濘還是荊棘叢生。

終於我們的實驗資料慢慢變得有規律起來,面對棘手的麻煩我們也能鎮定自若,實驗的因素探索一個個完成,一點點接近於目標。回望之前,發現與取得的成績,獲得的知識相比,以前都算不了什麼。

不得不承認,通過這項本科實踐創新訓練專案,我們學到了很多,得到了很多,有些是書本上永遠也學不來的,有些僅靠我們自己摸索幾乎為不可能的,有些僅憑我們自行監督是無法堅持下來的。

在這裡要感謝關心愛護我們的老師,學長學姐還有同屆同學,沒有你們我們無法完成這項意義深刻的工作。

第五篇:生物技術實驗心得體會

生物技術實驗心得體會

基因克隆技術是分子生物學的核心技術,其目的是獲得某一基因或dna片段的大量拷貝,用於深入分析基因的結構與功能,並可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。本論文主要從以下幾個方面來介紹基因克隆技術:目的基因的獲得 、目的基因和載體的連線、重組分子的擴增和鑑定。

可概括為∶分、切、連、轉、選。“分”是指分離製備合格的待操作的dna,包括作為運載體的dna和欲克隆的目的dna;“切”是指用序列特異的限制性內切酶切開載體dna,或者切出目的基因;“連”是指用dna連線酶將目的dna同載體dna連線起來,形成重組的dna分子;“轉”是指通過特殊的方法將重組的dna分子送入宿主細胞中進行復制和擴增;“選”則是從宿主群體中挑選出攜帶有重組dna分子的個體。基因克隆技術包括把來自不同生物的基因同有自主複製能力的載體dna在體外人工連線,構建成新的重組dna,然後送入受體生物中去表達,從而產生遺傳物質和狀態的轉移和重新組合。

一. 目的基因的獲得

目的基因是指所要研究或應用的基因,也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。基因工程流程的第一步就是獲得目的dna片段,。所需目的基因的來源, 不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr 法、化學合成法、cdna法及建立基因文庫的方法來篩選

pcr方法

pcr 是一種在體外快速擴增特定基因或dna。聚合酶鏈式反應(pcr)是體外酶促合成特異dna片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等幾步反應組成一個週期,迴圈進行,使目的dna得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅可用於基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用於疾病的診斷或任何有dna,rna的地方。

化學合成法制備基因片段

採用dna合成儀,對目的基因進行分段合成,然後進行連線,可以得到所需的目的基因。

二、 重組質粒的構建

dna體外重組是將目的基因在dna連線酶作用下,連線到合適的載體dna上,以便下一步轉化之用。重組的dna分子是在dna連線酶的作用下,有mg2 、atp存在的連線緩衝

系統中,將分別經酶切的載體分子與外源dna分子進行連線。連線反應的溫度在37℃時

有利於連線酶的活性。但是在這個溫度下粘末端的氫鍵結合是不穩定的。因此採取折中的溫度,即12~16℃,連線12~16h(過夜),這樣既可最大限度地發揮連線酶的活性,又兼顧到短暫配對結構的穩定。

三、重組分子的擴增和鑑定

重組dna分子匯入受體細胞

目的基因和載體在體外連線形成重組dna分子後,需要被匯入受體細胞中才能進行增殖和(或)表達。受體細胞是重組基因增殖的場所,所以對受體細胞也應具有幾點要求:①容易接納重組dna分子;②對載體的複製擴增無嚴格限制;③不存在特異的能降解外源dna的內切酶體;④不對外源dna進行修飾。一般將重組dna分子匯入原核細胞的過程稱為轉化,而匯入真核細胞的過程稱為轉染。將重組dna分子和感受態大腸桿菌細胞相混合,使重組dna分子進入大腸桿菌中,就可以實現重組dna分子的轉化。

重組dna分子的鑑定

(本文 來自本站)

重組dna分子匯入受體細胞後是否得到擴增,擴增後的重組dna分子是否正確,匯入的重組dna分子是否含有正確的插入片段,重組dna分子能否表達插入的目的基因,一般可以採用x-gal篩選的方法對重組dna分子進行鑑定。

四、實驗中的注意事項

1、大腸桿菌液體培養基和固體篩選培養基製備:

1) 接種過程中,試管或三角瓶口等,也可通過火焰灼燒滅菌。

2) 培養基、橡膠製品、塑料製品等不能使用乾熱滅菌。

3) 在加熱過程中應不斷攪拌,以防瓊脂粉沉澱糊底燒焦,並應控制火力,以免培養基起泡而溢位容器。

4) 注意培養基分裝時避免其沾汙三角瓶口、試管口。

5) 嚴格按照高壓蒸汽滅菌的滅菌指標(溫度、壓力、時間)對培養基、器皿滅菌,確保滅菌徹底。

2、大腸桿菌工程菌平板培養:

1) 劃線分離時,挑菌量要小,嚴格無菌操作,避免環境中的雜菌汙染。

2) 畫線時接中環圈內不能有菌膜產生,會造成接種數過多,結果不明顯。

3、pcr擴增目的基因片段:

1) pcr體系所加成分的實際用量,應根據實驗者選用的該成分的終濃度及所擁有的貯備液濃度進行核算。

2) 加樣時要認真,吸頭垂直進入試劑管,每加完一樣要換一個吸頭,同時在已加的樣品前做個記號以防止錯加或漏加,避免汙染。

3) taq聚合酶(置於冰盒上)應最後加入,儘量減少室溫接觸機會。加酶時吸頭深入不可過深,酶量不能過多。

4、回收目的基因與載體連線:

1) 注意調轉速

2) 敞開管蓋放置

3) 向吸附膜中間位置懸空滴加30ul洗脫緩衝液te(洗脫緩衝液te需使用前60℃水浴預熱)

4) 蓋好管蓋,靜置10min

5、大腸桿菌液體培養:

1) 接種環節應嚴格進行無菌操作。

2) 實驗中要注意細菌的生長狀態和密度,儘量使用對數生長期的細胞。密度過高或不足均會使轉化率下降。菌體密度與震盪培養的轉速密切相關,根據測定的菌液od值調整培養時間。

3) 接種的試管、三角瓶等應做好標記,註明菌種、日期、組別、姓名等。

6、大腸桿菌感受態細胞製備及轉化:

1) 所有操作均應在無菌條件和冰上進行。

2) 所使用的器皿必須經過滅菌。並且要防止跡量的去汙劑或其它化學物質、雜菌、dna酶或雜dna所汙染,否則會大大降低細菌的轉化效率。

3) 注意轉化的質粒 dna 的質量和濃度。當加入的外源dna的量過多或體積過大時,則會使轉化率下降。以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低,大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。

4) 實驗所用的溶液最好用3次蒸餾水配製。

7、篩選重組轉化菌落:

1) 在含有x-gal和iptg的篩選培養基上,攜帶載體dna的轉化子為藍色菌落,而攜帶插入片段的重組質粒轉化子為白色菌落,平板如在37℃培養後放於冰箱3-4小時可使顯色反應充分,藍色菌落明顯。不是一開始就4℃,是等菌長出來之後。一般菌長出來就會有藍色的了,4℃之後會進一步顯色。

2) 當出現藍斑較大,白斑很小附在周圍,還有藍白鑲嵌的斑即衛星菌落的時候,可以小心挑取中間的那個菌落,有可能是陽性克隆。

3) 要注意培養時間不宜過長,出現陽性菌落就及時處理,以12-16小時為宜。 4) 培養基中加抗生素的時候,溫度不能高了,不燙手為宜,防止抗生素失效。

8、菌液pcr分析:

注意移液槍正確的使用方法,各種量程的除錯,一般以接近最大量程的為準。

9、取大腸桿菌重組質粒dna和酶切分析

1) 《質粒小量提取試劑盒》進行質粒的提取的第三步和第四步之間的時間,操作要流暢快速,決定了實驗成敗

2) 禁止吸出沉澱

五、總結

在分子生物學中,基因克隆是一種常用的技術。其中關鍵技術是dna重組技術,它利用酶學方法將不同來源的dna分子進行體外特異性切割,重新拼接組裝成一個新的雜合dna分子。在此基礎上將雜合dna分子轉入一定宿主細胞中進行擴增,形成大量的子代分子,此過程稱基因克隆。有目的地通過基因克隆技術,人為操作改造基因,改變生物遺傳性狀的系列過程總稱為基因工程。

基因工程是把雙刃劍。如果不加節制的使用基因工程,讓它去為你包治百病,那樣你的整體免疫系統也將發生錯亂,讓你完全可以抵擋的疾病訪問造成你的死亡。如果人們想造什麼動物就造什麼動物,讓這些動物急速的泛濫,動物的天敵關係,人類的生態平衡都將被破壞,動物也將超過人類,霸佔我們賴以生存的地球。而且,若是誰都想起死回生,我想終有一天我們將因為人口氾濫而滅亡。

基因工程知識一種讓科技發展的手段,而不是我們的目的,我們要遵循自然規律,正確的對待基因工程,正確的對待生活。